Teknologi Membran Dan Penjelasan Vaksin (Ⅱ)

Dalam artikel sebelumnya, kami mempunyai beberapa pengenalan awal kepada vaksin dan strategi penjelasan vaksin, dan kami akan terus menerokanya dalam artikel ini yang lain. Susulan daripada perkara di atas, kami akan terus berkongsi penjelasan vaksin dan aplikasi tisu membran yang berkaitan.

 

2.2.2 Pengaruh sifat fizikal dan kimia virus

Selepas mempertimbangkan sistem pengeluaran dan kaedah untuk membuang bahan cemar yang berkaitan dalam langkah penjelasan, adalah penting untuk mengambil kira ciri-ciri virus dan memberi tumpuan kepada memaksimumkan hasil virus.

 

2.2.2.1 Penyerapan virus yang mudah
Bahan bercas positif dan bantuan penapis (seperti diatomit) telah dibangunkan untuk meningkatkan kesan penapisan dalam. Walaupun cas positif meningkatkan penangkapan asid nukleik dan HCP, diatomit diketahui mengikat serpihan sel dan koloid. Walau bagaimanapun, bahan-bahan ini juga boleh mengekalkan virus melalui mekanisme penjerapan. Oleh kerana virus biasanya bercas negatif dalam larutan, interaksi elektrostatik dengan penapis bercas positif mungkin berlaku.
Virus juga boleh mengikat melalui interaksi hidrofobik atau tidak spesifik dengan bahan penapis tertentu (seperti diatomit atau gentian kaca). Virus bersampul, kerana sampul lipidnya, lebih mudah terdedah kepada penjerapan ini. Jika virus terserap ke penapis melalui interaksi elektrostatik, dan zarah virus tertanggal akibat persaingan garam, membilas penapis dengan penimbal yang sangat konduktif boleh memulihkan sebahagian virus. Walau bagaimanapun, ini juga mungkin menghilangkan bahan cemar seperti HCP atau asid nukleik. Oleh itu, penggunaan bahan penapis alternatif, seperti polipropilena yang lebih lengai, adalah diutamakan.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Adalah diketahui umum bahawa virus influenza terdedah kepada kehilangan penjerapan semasa penjelasan. Oleh itu, penggunaan penapis tanpa cas, penapis berasaskan polipropilena, adalah sesuai untuk menjelaskan pengumpulan influenza. Thompson et al melaporkan penggunaan penapis polipropilena berkadar nominal 1.2 μ m diikuti oleh 0.45 μm membran PVDF untuk menjelaskan virus influenza berasaskan sel yang dihasilkan oleh sel MDCK. Sebanyak sembilan ujian penulenan telah dilakukan pada skala 20L, memuatkan 111 L / m2 untuk penapis polipropilena 1.2 μm dan 105 L / m2 untuk penapis PVDF 0.45 μm. Keputusan menunjukkan bahawa majoriti virus yang sedang berjalan pulih dengan baik (78-154%). Mereka juga melaporkan sehingga 58% penyingkiran hcDNA, tetapi tiada penyingkiran HCP yang ketara.

 

2.2.2.2 Menggunting virus sensitif

Sesetengah virus (berkapsul atau tidak berkapsul) mempamerkan rintangan mekanikal yang rendah dan mungkin dimusnahkan oleh pendedahan ricih semasa langkah sentrifugasi dan penapisan membran. Daya ricih yang dijana semasa langkah penulenan yang melibatkan penapisan atau kromatografi boleh menyebabkan sampul virus jatuh, sekali gus menjejaskan kejangkitan. Bergantung pada saiz, ketebalan, dan geometri kapsid, kapsid virus mungkin rapuh atau, sebaliknya, tahan terhadap tekanan tinggi. Sesetengah virus bersampul, seperti virus influenza, adalah anjal kepada tekanan mekanikal dan boleh menahan ubah bentuk yang besar. Sebaliknya, daya ricih boleh menyebabkan sampul virus yang kurang tahan, seperti retrovirus, jatuh, sekali gus menjejaskan kebolehjangkitan virus.

VLP sampul surat yang dijana ekstraselular juga sangat terdedah. Kadar ricih yang tinggi dijana dalam proses emparan, terutamanya pada bahagian masuk dan keluar (kadar ricih yang tinggi dijana pada antara muka gas-cecair). Apabila virus telah disucikan dengan sentrifugasi kecerunan, keupayaan transduksi sesetengah retrovirus telah menjadi lemah dengan ketara. Apabila mereka bentuk pengasingan emparan, ketidakstabilan relatif zarah virus kepada daya ricih mesti dipertimbangkan. Daya emparan bukan satu-satunya sumber kejutan ricih, lebih penting ialah reka bentuk peralatan, terutamanya pada import dan eksport juga mempunyai kejutan ricih yang ketara. Perbezaan dalam reka bentuk skala yang berbeza boleh membawa kepada perbezaan dalam hasil dan pemulihan virus sensitif ricih pada skala yang berbeza.

Virus sensitif ricih harus direka bentuk dengan teliti kerana magnitud tegasan ricih dan masa pendedahan kepada tegasan (disebabkan oleh peredaran semula) boleh menjadi tinggi. Untuk virus sensitif ricih, peranti litar terbuka (gentian berongga atau peranti plat terbuka) lebih disukai untuk mengurangkan pergolakan dan daya ricih dalam saluran suapan.

Pilihan parameter operasi juga harus meminimumkan kerosakan pada zarah virus: aliran silang rendah, tekanan transmembran sederhana (TMP), dan masa pemprosesan yang singkat.

Pencemaran membran di bawah tekanan tinggi membawa kepada kehilangan kejangkitan virus, mungkin disebabkan oleh daya tindakan ricih boleh bertindak pada sampul virus. Pemisahan berasaskan membran adalah berdasarkan saiz, dan pengumpulan perencat virus berat molekul besar dan zarah virus boleh mengurangkan kejangkitan vektor virus.

Degradasi virus sensitif ricih semasa penapisan dalam tidak didokumenkan secara meluas. Kehilangan virus dalam penapisan dalam paling kerap dikaitkan dengan perangkap, penjerapan atau masa - dan degradasi virus yang bergantung kepada suhu produk. Malah, walaupun tegasan mekanikal mungkin berlaku dalam sistem NFF, masa pendedahan untuk produk NFF untuk ricih adalah sangat singkat berbanding dengan teknologi lain kerana pas tunggal pantas yang dialami dalam produk NFF.

 

2.2.2.3 Memintas mengikut saiz apertur

Virus melebihi 100 nm boleh dikekalkan dengan membuang mycoplasma atau membran gred steril (0.22 μm dan ke bawah). Dalam kes ini, perhatian khusus harus diberikan kepada pemilihan penapis. Untuk langkah TFF penapisan mikro, 0.Membran 45μm atau 0.65μm lebih disukai untuk saluran produk yang baik. Untuk penapisan berbilang langkah NFF, lapisan paling padat adalah Lebih besar daripada atau sama dengan 0.45μm. Penjagaan harus diambil semasa memilih penapis dalam, kerana sesetengah peranti penapis dalam mungkin mengandungi lapisan filem, yang boleh mengakibatkan kehilangan produk daripada pemacu pengekalan. Pengagregatan virus memberi kesan negatif kepada pengeluaran virus dan meningkatkan pengekalan virus disebabkan saiz virus.

Menurut paten oleh Andre dan Champluvier, homogenisasi boleh menghalang atau mengehadkan penyumbatan penapis dengan mengurangkan saiz agregat, memberikan hasil yang lebih tinggi. Penghomogenan juga meningkatkan kapasiti penapisan hasil tuaian, yang meningkat sebanyak 2.4-3 kali.

Terlalu banyak kekotoran boleh mengganggu pemulihan virus. Kekotoran cenderung menyumbat penapis, dan liang membran yang tersumbat boleh mengakibatkan kadar laluan virus berkurangan. Dalam paten oleh de Vocht dan Veenstra, disebutkan bahawa penjelasan langsung ketumpatan sel tinggi Per. Pengumpulan dengan TFF({{0}}.65 atau 0.2 μm membran) menghasilkan pemulihan virus tanpa adenovirus. Pemulihan boleh dicapai dengan penyingkiran pemendakan terpilih DNA sel perumah sebelum langkah TFF 0.65 μm. 70% daripada adenovirus.

 

 

2.3 Kajian kes: Pengoptimuman penjelasan vaksin virus

Pada Persidangan Antarabangsa Mengenai Proses Biologi 2011, Sanofi Pasteur membentangkan pendekatan rasional untuk menapis penapis untuk pembangunan jujukan baru yang dijelaskan untuk vaksin virus calon. Penyelidikan ini bertujuan untuk mengatasi masalah yang dihadapi dalam mengoptimumkan proses kultur sel dan virus. Pengubahsuaian kepada proses huluan mengakibatkan kehilangan hasil sebanyak 20% dan pencemaran penapis pramatang semasa langkah penjelasan, menyebabkan tiada peningkatan skala. Untuk mewujudkan langkah penjelasan yang mantap dan berskala, pembangunan semula lengkap jujukan penapis diperlukan, dengan kadar pemulihan virus lebih tinggi daripada 85%.

Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80%. Kadar pemulihan ester selulosa dan penapis gentian kaca bergantung pada penilaian penapis (20% atau 90%).

Sebagai langkah kedua, Sanofi Pasteur menilai beberapa kombinasi (urutan fasa 2 atau fasa 3) daripada tujuh penapis yang telah dipilih sebelumnya dalam kajian saringan. Ujian pengelasan aliran berterusan telah dijalankan dengan penapis kecil. Selain itu, eksperimen ini menggunakan hasil yang lebih tinggi daripada kajian saringan. Berdasarkan keputusan pemulihan virus dan kapasiti penapis, pasukan memilih dua kombinasi terbaik untuk kajian lanjut.

- Urutan 1(Peringkat 2):30 μm penapis polipropilena terlipat nominal, diikuti oleh ester selulosa komposit dan penapis berbilang lapisan gentian kaca (keliangan 1/0.5 μm)

- Urutan 2(peringkat 3): prapenapis yang sama (penapis polipropilena berkadar nominal 30 μm), diikuti dengan penapis polipropilena berbilang lapisan perantaraan dan akhirnya filem polieter sulfon asimetri.

 

The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85%), seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1.

Rajah 1 Purata pemulihan virus pada setiap langkah penapisan. Kajian kestabilan dinilai untuk tiga jujukan penapisan, yang mana hanya jujukan 1 menggunakan polipropilena terlipat berkadar nominal 30 μm dan 1.0/0.5 μm ester selulosa dan penapis gentian kaca memenuhi sasaran pemulihan global .

Emparan juga dinilai sebagai langkah penjelasan utama, diikuti dengan penapisan akhir {{0}}.45 μm. Beberapa pasangan kelajuan/tempoh telah diuji. Walaupun kadar penapisan 0.45 μm meningkat dua kali ganda, hasil akhir adalah lebih rendah daripada sasaran 85%. Akibatnya, sentrifugasi belum lagi dikaji.

Akhirnya, prestasi jujukan penapisan polipropilena dan gentian kaca dinilai pada skala yang lebih besar (saiz bioreaktor 160 L). Urutan penapis ditunjukkan dalam Rajah 2.

Rajah 2 Menjelaskan gabungan penapis dan perwakilan grafik hasil langkah rentetan. Kereta api A ialah proses tradisional dan kereta api B ialah proses yang dioptimumkan. Urutan B yang dioptimumkan boleh mengurangkan kawasan pra-penapisan sebanyak 3 kali, membatalkan langkah penapisan pertengahan, dan mengurangkan kawasan penapisan akhir sebanyak 10 kali, sekali gus meningkatkan pemulihan virus global sebanyak 3%.

Beberapa kelompok berjaya dijelaskan tanpa tanda-tanda penyumbatan penapis, masa proses selaras dengan had pengeluaran, dan hasil virus > Lapan puluh lima peratus. Pengoptimuman langkah penjelasan tidak mempunyai kesan ke atas langkah hiliran dan atribut kualiti utama vaksin. Oleh itu, urutan penjelasan yang dipilih telah digunakan dalam proses pengeluaran vaksin (bioreaktor bersaiz 1000 L) dan prestasinya telah berjaya disahkan.

 

03 Penjelasan vaksin bakteria

3.1 Pertimbangan untuk penjelasan vaksin bakteria

Menurut Tesaurus Perubatan (2015), vaksin bakteria ditakrifkan sebagai penggantungan bakteria yang dicairkan atau dibunuh atau derivatif antigennya yang digunakan untuk mendorong tindak balas imun untuk mencegah atau merawat penyakit bakteria. Secara umumnya, vaksin bakteria boleh dibahagikan kepada empat subkategori berdasarkan jenis antigen aktif. Ejen ini boleh:

- Membunuh atau melemahkan seluruh bakteria hidup. Juga dikenali sebagai vaksin BCG.

- Pembersihan penentu antigen (vaksin subunit). Vaksin antraks atau vaksin pertusis acellular.

- Toksin bakteria (toksoid). Toksoid difteria dan tetanus.

- Plasmid (pDNA).

Disebabkan oleh kepelbagaian luas produk keluarga, cabaran proses huluan dan hiliran sebahagian besarnya bergantung pada jenis vaksin yang dihasilkan. Oleh itu, selepas langkah penapaian awal boleh disucikan atau tidak disucikan, supaya langkah penjelasan dapat dijalankan.

 

3.2 Strategi penjelasan vaksin bakteria

3.2.1 Toksoid

Dua toksoid yang paling biasa dihasilkan untuk kegunaan vaksin ialah difteria dan tetanus, yang masing-masing dihasilkan oleh Corynebacterium diphtheriae dan Clostridium tetani. Pengeluaran kedua-dua vaksin tertakluk kepada keperluan peraturan yang ketat. Laporan teknikal WHO dan lampirannya membuat cadangan yang jelas untuk memastikan kualiti, keselamatan dan keberkesanan vaksin tetanus dan difteria. Amalan Pengilangan Baik Am digunakan untuk pengeluaran kedua-dua vaksin, dan pekerja mesti dilatih dengan betul dan menerima imunisasi penggalak terhadap kedua-dua penyakit.

GMP dengan tegas memerlukan ketulenan dan kualiti produk akhir mesti ditunjukkan. Menurut WHO dan EP, keberkesanan vaksin tetanus akhir mesti ditentukan dengan perbandingan in vivo atau dengan mana-mana kaedah terbukti lain dengan bahan rujukan yang sesuai yang ditentukur dalam unit antarabangsa mengikut Piawaian Antarabangsa untuk toksoid tetanus. Keperluan yang dikemas kini untuk keberkesanan telah diterbitkan pada tahun 2011 dan mungkin berbeza-beza bergantung pada kaedah penilaian. Keselamatan (toksik bebas toksin dan pemulihan) bagi setiap kumpulan vaksin juga mesti ditunjukkan. Akhir sekali, kestabilan vaksin, terutamanya dalam masa nyata, mesti ditangani.

 

3.2.2 Vaksin DNA plasmid

Vaksin DNA plasmid digunakan untuk tujuan kesihatan haiwan, dan beberapa vaksin DNA plasmid untuk kegunaan manusia berada dalam pelbagai peringkat pembangunan dan penilaian klinikal. Selepas penapaian E. coli, bakteria dikumpulkan dan dibelah untuk membebaskan DNA plasmid.

Penyingkiran serpihan sel biasanya dilakukan dengan sentrifugasi atau penapisan. Subjek ini telah dibincangkan secara meluas dalam penerbitan baru-baru ini. Dalam penerbitan ini, proses dan cabaran pDNA huluan, hiliran dan perumusan semasa.

Penulis juga memberikan pandangan tentang jurang pada setiap langkah proses pembuatan pDNA biasa dan potensi inovasi masa depan dan/atau jurang teknologi semasa yang boleh membawa kepada pengoptimuman proses selanjutnya.

Vaksin DNA plasmid disediakan dalam dua langkah. Pertama, sel-sel bakteria dikeluarkan dari medium kultur, dan kedua, serpihan sel selepas lisis sel dikeluarkan. Bergantung pada skala, sel-sel dikumpulkan menggunakan sentrifugasi atau penapisan mikro TFF. Empar cerucuk cakera dikeluarkan secara berselang-seli pada kelajuan tinggi, dan hasil plasmid bergelung besar adalah lemah akibat kerosakan ricih semasa nyahcas. Jika sentrifugasi mesti digunakan, emparan mangkuk pepejal adalah yang terbaik. Saluran terbuka, peranti TFF rata dengan 0.1 atau 0.2 μm membran penapisan mikro atau peranti gentian berongga boleh berfungsi dengan baik.

Oleh kerana peranti gentian berongga mempunyai kapasiti beban pepejal yang tinggi, ia kadangkala diberi keutamaan. Lazimnya proses ini beroperasi pada 3-5 kali kepekatan, diikuti dengan 3-5 volum transfiltrasi. Untuk mengurangkan ricih dan polarisasi membran kawalan yang lebih baik, operasi kawalan penembusan amat disyorkan. Walaupun emparan lebih menjimatkan kos dalam operasi komersial berskala besar, proses skala yang lebih kecil cenderung menggunakan penapisan kerana mudah alih dan kemudahan operasi.

Flocculant telah digunakan untuk memudahkan pemprosesan, tetapi ia boleh menyebabkan kehilangan produk. Sesetengah juga mengesyorkan menggunakan zarah bumi diatom lengai, diikuti dengan penapisan beg.

Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) penapis membran bagus untuk mengeluarkan serpihan sel. Disebabkan penyumbatan serpihan sel yang kuat, penapisan aliran rendah atau tekanan rendah lebih diutamakan. Penapis mikro berasaskan Tff telah digunakan untuk langkah ini dan penapis beg skala industri. Keretakan statik (dalam bekas pengadun) dan berterusan (menggunakan pengadun statik dalam talian) memerlukan penapis yang berbeza.

 

3.3 Kajian kes: Perbandingan keberkesanan kaedah sentrifugasi, NFF dan TFF untuk menjelaskan toksin tetanus

Muniandi et al. membandingkan tiga kaedah berbeza untuk menjelaskan toksin dan toksoid tetanus daripada cecair penapaian, iaitu sentrifugasi, penapisan dalam (NFF), dan TFF. Bahan ujian dihasilkan dalam penapai 400L menggunakan medium Miller (MMM) yang diubah suai. Dalam kajian sentrifugasi, sel-sel telah dipisahkan dari jantung pada 4000 RPM dalam bekas 6 × 1L selama 60 minit. Sampel supernatan diambil untuk mengesan pemulihan toksoid. Penapisan dalam menggunakan penapis dalam 0.45μm dan 0.22μm yang mengandungi tanah diatom dan selulosa untuk menjelaskan sup penapaian. Proses ini dijalankan pada suhu 35 darjah dan 12psi.

Modul TFF panel rata terbuka diikat secara terma pada 0.22μm PVDF membran dalam kaedah TFF. Proses penjelasan berasaskan TFF telah dilakukan pada kadar aliran silang 2000 L/j pada 23 darjah, dan turasan yang telah dijelaskan tertumpu pada kadar aliran silang 1000 L/j pada 25 darjah menggunakan membran PES sandwic TFF konvensional 30kD. Cecair daging yang telah dijelaskan (kira-kira 6L) dipekatkan 10 kali ganda dalam proses ultraturasan ini. Ujian toksoid tetanus telah dilakukan pada sampel penahan pekat untuk menilai pemulihan produk.

Penapisan dalam menghasilkan kadar pemulihan produk kira-kira 89%, dengan unit TFF menghasilkan kadar pemulihan produk melebihi 97%. Proses penapisan mikro dan ultraturasan secara konsisten menghasilkan pemulihan produk yang lebih tinggi daripada proses NFF. Keputusan ini adalah berdasarkan ujian pemberbukuan (Lf).

 

04Penjelasan vaksin polisakarida

4.1 Pertimbangan penjelasan vaksin polisakarida

Proses pengeluaran kedua-dua vaksin polisakarida tanpa gandingan/bebas dan vaksin polisakarida berganding bermula dengan kultur bakteria perumah dalam penapai. Pada akhir penapaian, bakteria boleh dirawat dengan agen pembersih seperti DOC(sodium deoxycholate), Triton®X-100 atau reagen lain yang sesuai untuk memusnahkan bakteria dan menggalakkan pembebasan polisakarida. Disebabkan kapasiti bateri yang besar, pengumpulan terus melalui NFF tidak dapat dilaksanakan secara ekonomi kerana daya pemprosesan boleh menjadi sangat rendah. Oleh itu, pilihan yang ideal ialah menggunakan emparan untuk memisahkan rumpun sel. Julat penapisan mikro TFF juga boleh digunakan. Pusat bebas sel/penembus yang mengandungi polisakarida yang diminati diperjelaskan lagi oleh sistem penapisan dalam NFF, diikuti dengan penapisan biobattered, dan kemudiannya diteruskan ke rawatan hiliran untuk penulenan selanjutnya.

 

4.2 Strategi penjelasan vaksin polisakarida

4.2.1 Prosedur Penjelasan Pertama

Sentrifugasi adalah salah satu teknik yang paling biasa untuk memisahkan sel daripada cecair penapaian. Bergantung pada skala, sentrifugasi berterusan atau sentrifugasi kelompok boleh dipilih. Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa pengoptimuman yang betul bagi keadaan sentrifugasi dan operasinya adalah penting untuk pembersihan hiliran yang berjaya. Apabila memilih membran TFF dan saiz liang tertentu, adalah penting untuk mengingati berat molekul polisakarida, yang selalunya besar dan kompleks dari segi struktur, dengan berat molekul antara lebih kurang 500kDa kepada lebih daripada 1000kDa. Oleh kerana saiz liang terbuka yang besar, penggunaan membran MF 0.22μm, 0.45μm, 0.65μm dapat memastikan pemulihan molekul PS yang berjaya dalam larutan osmotik.

 

4.2.2 Prosedur Penjelasan Sekunder

Kejelasan/kekeruhan larutan penapaian bebas sel yang mencapai langkah penjelasan sekunder bergantung pada bakteria tertentu, jenis belahan, jenis serum individu dan teknik yang digunakan untuk langkah penjelasan utama. Kekeruhan pusat boleh berkisar antara 50 hingga 150 NTU. Penapis dalam ketumpatan pecahan bercas positif yang diperbuat daripada diatomit yang diresapi dengan gentian selulosa terisi boleh digunakan untuk menjelaskan dan mengurangkan kekeruhannya kepada < 5NTU.

Daya pemprosesan volum penapis dalam ini boleh berjulat daripada kira-kira 150 L/m3 hingga 250 L/m3. Lazimnya, penyelesaian produk yang diperjelas ditapis melalui gred pengurangan biosokongan 0.45 μm berikutnya atau membran gred steril 0.22 μm untuk mengeluarkan sebarang zarah sel, koloid dan mikroorganisma yang berpotensi.

 

4.3 Kajian kes: Penjelasan pusat sup penapaian Streptococcus pneumoniae selepas sentrifugasi

Sel-sel telah diasingkan dengan menambah {{0}}.1% (v/v) jenis 8 Streptococcus pneumoniae sup fermentasi (20 L) dengan sentrifugasi berterusan. Bahagian tengah koleksi ditapis melalui dua penapis dalam bumi bercas positif dan diatom yang berasingan yang mengandungi gentian selulosa. Turasan penapis dalam individu kemudiannya ditapis melalui membran PVDF gred pengurangan terbio 0.45μm. Semua ujian penapisan dilakukan dalam mod aliran malar dengan pam peristaltik. Ujian penapisan menggunakan penapis dalam bercas dan sup penapaian Streptococcus pneumoniae serotype 8 mengakibatkan kekeruhan menurun daripada kira-kira 120 NTU kepada 3 NTU. Ujian telah dijalankan pada kadar aliran 140,150 L/m2 /jam dan perbezaan tekanan titik akhir sebanyak 20-25 psi, dengan daya pemprosesan volum lebih kurang 180-200 L/m2.

Ujian penapisan yang serupa telah dilakukan pada sup penapaian Streptococcus pneumoniae serotype 19A. Cecair 19A yang disentrifugasi diperjelaskan melalui penapis dalam bercas, yang mengurangkan kekeruhan daripada kira-kira 40 NTU kepada 3 NTU. Ujian telah dilakukan pada kadar aliran malar kira-kira 140-160 L/ m2 /jam, dan daya pemprosesan isipadu 200-230L/ m2 dicapai pada tekanan titik akhir kira-kira 15 psid. Analisis HLPC sampel produk yang dikumpul semasa ujian penilaian penapisan menunjukkan tiada kehilangan hasil yang ketara untuk penapisan dalam atau 0.45 μm (atau 0.22 μm) membran.

 

05 Kesimpulan

Pembangunan proses penjelasan memerlukan penyepaduan beberapa proses unit seperti sentrifugasi, TFF-MF, penapisan dalam dan penapisan aseptik. Pengoptimuman proses penjelasan memerlukan pemahaman tentang cara operasi unit yang berbeza mempengaruhi satu sama lain. Cabarannya ialah untuk memilih teknologi dan alatan (peralatan dan lekapan) untuk memenuhi keperluan cecair proses yang semakin kompleks yang dihasilkan oleh bioreaktor yang lebih cekap masa kini. Peningkatan produktiviti huluan (titer virus, ketumpatan sel, dll.), serpihan sel, dan produk lisis sel meningkatkan kesukaran proses penjelasan dan mengelirukan pilihan peralatan pengasingan dan penapisan.

Reka bentuk peralatan, kemudahan penggunaan dan kebersihan perlu dipertimbangkan semasa membuat pemilihan skala proses. Ini akan memastikan penukaran yang cekap dan keselamatan pengendali apabila berurusan dengan penapis yang dibuang. Untuk membangunkan proses penjelasan, integrasi kukuh langkah-langkah penjelasan adalah penting untuk memastikan bahawa pemprosesan tuaian huluan adalah kos efektif. Pelbagai unit penapisan tersedia untuk memudahkan ujian makmal, pengeluaran perintis dan pemprosesan bersaiz penuh. Dengan melaksanakan pelan kerja skala yang direka bentuk dengan baik yang menilai pelbagai pilihan penjelasan, seseorang boleh dengan yakin memilih dan saiz penapis penjelasan untuk melindungi operasi unit hiliran sambil mengurangkan kos operasi.

Penjelasan vaksin memberikan beberapa cabaran. Lazimnya, proses penapisan perlu disesuaikan dengan sistem pengeluaran, penyahaktifan atau agen lisis, dan persembahan antigen, tidak semestinya vaksin. Proses vaksin tradisional biasanya menggunakan sentrifugasi untuk menjelaskan vaksin pada mulanya. Vaksin moden dengan pelbagai platform teknologi dan volum pemprosesan yang lebih kecil menjadikan vaksin lebih sesuai untuk penjelasan oleh teknologi berasaskan membran. Vaksin yang baru dibangunkan menggunakan garisan sel dan sistem ekspresi moden serta menggunakan keadaan kultur sel yang lebih jelas menjadikan banyak proses vaksin lebih kondusif untuk penapisan.

 

Walau bagaimanapun, kepelbagaian dalam komponen antigen atau "antigen sasaran" produk vaksin meningkatkan kerumitan penjelasan penapisan. Antigen berbeza dalam saiz, kimia permukaan, dan cas. Ciri-ciri ini menjejaskan hasil dan pemulihan antigen. Vaksin memberikan cabaran unik untuk penjelasan, terutamanya disebabkan oleh saiz makromolekulnya. Ini, digabungkan dengan isu keupayaan sekitar penjelasan, meningkatkan keperluan untuk panduan tentang strategi pembangunan proses.

Saiz dan skala operasi berskala komersil untuk pengeluaran vaksin mempunyai kesan yang ketara ke atas pilihan teknologi penjelasan. Terletak di hulu proses, pengoptimuman penjelasan yang betul adalah penting untuk kejayaan operasi unit hiliran, memaksimumkan hasil, pemulihan dan keteguhan proses. Walaupun sentrifugasi kekal sebagai pilihan teknikal yang berdaya maju untuk penjelasan utama, unit penapisan mikro saluran terbuka (TFF) untuk penjelasan primer dan penapis dalam halus atau penapis membran untuk penjelasan sekunder semakin diterima dalam industri vaksin. Perubahan ini didorong oleh keperluan untuk pemprosesan yang lebih pantas, pembangunan proses yang pantas, proses mudah alih dan pelaksanaan sekali guna. NFF menawarkan proses ekonomi yang sesuai untuk pilihan sekali guna skala kecil hingga besar. Disebabkan oleh keperluan kawal selia yang berubah, ketersediaan peranti atau modul pra-aseptik penyinaran gamma yang direka untuk autoklaf menggalakkan penyesuaian teknologi berasaskan NFF atau TFF yang lebih pantas.

Banyak proses vaksin klasik melibatkan evolusi operasi unit penjelasan, sebahagian besarnya disebabkan oleh kekangan peraturan dan kos tinggi yang berkaitan untuk pengesahan semula dan penyerahan semula atau ujian klinikal. Proses platform menggunakan skim penjelasan berasaskan penapisan telah digunakan secara meluas dalam beberapa agen biologi dengan tahap kejayaan yang tinggi. Contoh dan kes yang digariskan dalam dokumen ini menunjukkan bahawa pengeluar vaksin mempunyai potensi untuk mencapai tahap kestabilan, daya maju ekonomi dan utiliti sekali guna ini dengan mengikuti pendekatan templat.

Kelebihan lain penapisan berbanding sentrifugasi ialah virus sensitif ricih atau virus yang cenderung terkumpul di antara muka udara. Memandangkan pengeluar peranti membawa produk baharu ke pasaran, pengeluar vaksin akan terus dilengkapi dengan lebih baik untuk proses penjelasan.

 

Sebagai syarikat pertama dalam litar penyetempatan, Teknologi Guidling telah mengumpul pengalaman relevan yang mencukupi dalam penjelasan vaksin. Guidling Technology ialah syarikat pembangunan dan pengeluaran yang memfokuskan pada biofarmaseutikal dan kultur sel, penulenan dan pengasingan. Produk digunakan secara meluas dalam bioperubatan, diagnosis, penapisan cecair industri, pengesanan, penjelasan, penulenan dan proses penumpuan; Guidling telah berjaya membangunkan tiub emparan ultraturasan, kaset membran ultraturasan/mikrofiltrasi, penapis penyingkiran virus, peranti penapis aliran tangen, susunan membran dalam, dsb., yang memenuhi sepenuhnya senario aplikasi biofarmaseutikal dan kultur sel.

Membran dan penapis membran kami digunakan secara meluas dalam kepekatan, pengekstrakan dan pengasingan pra-penapisan, penapisan mikro, ultraturasan dan penapisan nano. Rangkaian produk kami yang luas, daripada penapisan makmal sekali guna kecil kepada sistem penapisan jenis pengeluaran, ujian kemandulan, penapaian, kultur sel dan banyak lagi, boleh memenuhi keperluan ujian dan pengeluaran.