Soalan Lazim tentang Peranti Penapis Empar

Q1. Adalah perlu untuk mengasingkan protein dengan berat molekul yang berbeza, jadi berapa banyak perbezaan yang perlu diperlukan oleh berat molekul protein?

J: Saiz kedua-dua protein perlu berbeza sebanyak 10 kali atau lebih.

 

Q2. Boleh mengemparAlperanti penapis disterilkan dan tahan terhadap pencucian alkali?

J: Ia boleh disterilkan dengan larutan akueus etanol 75 peratus, dan membran boleh menahan 0.1-0.5N pencucian alkali natrium hidroksida.

 

Q3. Bagaimana untuk menangani jika protein dimendakan semasa kepekatan?

J: Jika protein tertumpu terlalu cepat atau terlalu pekat, ia boleh menyebabkan pemendakan protein, dan kepekatan akhir protein selepas kepekatan tidak boleh terlalu tinggi; Protein yang sensitif kepada kadar kepekatan dan cenderung untuk mendakan, kaedah penambahbaikan yang dicadangkan:

Kurangkan kelajuan emparan

Gunakan membran ultraturasan dengan potongan berat molekul yang lebih tinggi

Tiup dan sedut tiub pekat dan kemudian sentrifuge

 

Q4. Apakah sebab yang mungkin mengapaperanti penapis emparantidak boleh disentrifugasi ke bawah?

A: Anda boleh menggunakan kira-kira 20 peratus larutan akueus etanol untuk sentrifugasi awal jika tiub ultrafiltrasi tidak boleh disentrifugasi, kerana membran ultrafiltrasi benar-benar kering, permukaan membran hidrofobik lemah, dan fluks boleh dipulihkan selepas penyusupan dengan rendah. pelarut tegangan permukaan.

 

Q5. Kaedah penggunaan yang betul dan penyimpanan peranti penapis emparan

J: Peranti penapis emparan hendaklah disentrifugasi dengan air yang telah disucikan sebelum digunakan untuk mengesahkan integritinya. Selepas setiap penggunaan, ia dikehendaki disimpan dalam keadaan basah untuk mengelakkan membran daripada mengering.

 

Q6. Bagaimanakah peranti penapis emparan mengeluarkan endotoksin?

J: Peranti penapis emparan yang kami sediakan tidak dirawat dengan endotoksin, dan kerana endotoksin wujud secara meluas dalam alam semula jadi, sampel yang memerlukan endotoksin boleh pra-dibersihkan dengan 0.5N natrium hidroksida sebelum eksperimen, dan kemudian dibasuh dengan Air RO untuk membuang kebanyakan endotoksin.

 

Q7. Apabila protein pekat digunakan untuk analisis hiliran, didapati terdapat gangguan, apakah sebabnya?

A: Peranti penapis emparan boleh dicuci terlebih dahulu dengan larutan penimbal atau air yang telah disucikan. Jika gangguan masih wujud, basuh dengan 0.1N natrium hidroksida, dan kemudian basuh dengan air tulen.

 

Q8. It didapati tiada protein sasaran dalam pekat selepas kepekatan. Apakah sebab-sebab yang mungkin?

A: 1) Kepekatan awal protein tidak boleh terlalu rendah, jika kepekatan terlalu rendah, membran mungkin tidak dapat mengekalkan.

2)Pilih saiz liang membran yang sesuai. Kepekatan emparan tiub penapis tergolong dalam penapisan mati, dan saiz liang membran biasanya kurang daripada 2 kali atau lebih daripada protein sasaran.

3)Pilih kelajuan emparan yang betul

4) Sama ada protein sasaran mengendap

 

Q9. Rawatan pasif peranti penapis emparan

A: Prarawatan pasif permukaan peranti penapis emparan boleh mengurangkan kehilangan penjerapan protein pada permukaan membran, dalam kebanyakan kes, prarawatan lajur sebelum menumpukan penyelesaian protein yang dicairkan boleh meningkatkan pemulihan, Kerana penyelesaian boleh mengisi terdedah tapak penjerapan protein kosong pada membran dan permukaan, kaedah pempasifan adalah untuk pra-rendam lajur dengan jumlah larutan pempasifan yang tinggi selama lebih daripada 1 jam, siram lajur dengan teliti dengan air suling, dan kemudian sentrifugasi lajur sekali dengan air suling untuk mengeluarkan sepenuhnya larutan pempasifan yang mungkin kekal pada membran, berhati-hati agar tidak membiarkan membran kering selepas pempasifan, jika anda ingin menyimpannya untuk kegunaan masa hadapan, anda perlu menambah air suling steril untuk memastikan membran basah., sila hubungi jurutera kami untuk penyelesaian pasif biasa.

 

Q10. Adakah membran ultraturasan menapis molekul secara hierarki?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 peratus jika menggunakan membran ultraturasan 100kd, bagaimanapun, molekul yang lebih kecil daripada saiz liang membran tidak sepenuhnya melalui membran dengan bebas. Kadar pengekalan molekul 67kd adalah lebih daripada 70 peratus, dan protein 43kd juga lebih daripada 40 peratus terputus, pelbagai komponen dalam larutan campuran melepasi membran tidak semudah dan semudah penyelesaian komponen tunggal, Dalam amalan , jika anda ingin mengasingkan dua makromolekul, perbezaan berat molekul antara mereka hendaklah lapan kali atau lebih.

 

Q11. Bagaimana cara memisahkan molekul besar dan kecil dengan berkesan melalui ultrafiltrasi?

J: Disebabkan oleh keperluan proses, kekotoran dalam makromolekul dikeluarkan, atau molekul kecil dikeluarkan daripada makromolekul, ia adalah normal dalam pengeluaran. Ia adalah sangat perlu untuk memilih saiz liang membran yang sesuai, kaedah penapisan dan keadaan operasi. Secara umumnya, jika spesifikasi MWCO membran dipilih antara kedua-dua protein, pemisahan yang agak ideal boleh dicapai. Jika larutan protein agak cair, beroperasi di bawah tekanan rendah juga akan membantu mencapai hasil yang lebih baik. Pilih penapisan aliran tangen dan lakukan beberapa diafiltrasi untuk mendapatkan kesan pemisahan yang lebih baik.