Kaedah penyelenggaraan dan penggunaan tiub ultrafiltrasi

Kaedah penyelenggaraan dan penggunaan tiub ultrafiltrasi

Fungsi tiub ultrafiltrasi:

1) Kepekatan; 2) Desalting; 3) Gantikan penimbal; 4) Ia mempunyai kesan pembersihan separa.

1. Tiub ultrafiltrasi baru boleh digunakan secara langsung tanpa rawatan lain;

2. Tiub ultrafiltrasi tidak boleh disterilkan pada suhu tinggi;

3. Rawatan tiub ultrafiltrasi apabila menukar protein pekat

Tiub ultrafiltrasi boleh digunakan semula. Rendam dalam 0.1M NaOH selama 1-2 jam, basuh dengan air, dan kemudian basuh dengan larutan yang relevan (air yang disterilkan atau PBS) pada sentrifuge selama 3 kali, yang boleh digunakan untuk menumpukan protein baru;

4. Rawatan tiub ultrafiltrasi yang biasanya diletakkan

Untuk tiub ultrafiltrasi yang sering digunakan, rendam dalam 0.1M NaOH untuk 1-2j, basuh dengan air dan rendam dalam air yang disterilkan. Pastikan untuk memastikan membran penapis basah dan mencegah bakteria daripada berkembang;

5. Rawatan tiub ultrafiltrasi diletakkan untuk masa yang lama

Jika tiub ultrafiltrasi tidak digunakan untuk masa yang lama, rendam dalam 0.1M NaOH untuk 1-2h, basuh dengan air, dan rendam dalam 20% etanol untuk penyimpanan. Pastikan untuk memastikan membran penapis basah dan mencegah bakteria daripada berkembang;

6. Kelajuan centrifugal yang digunakan untuk tiub ultrafiltrasi

Kelajuan empar biasanya 4000rpm (3000g biasanya disyorkan, dan maksimum tidak boleh melebihi 4000g). Selepas sentrifugasi selama 5-8 minit, sampel 4ml boleh tertumpu kepada kurang daripada 1ml kepada berpuluh-puluh mikroliter; Sekiranya kelajuan terlalu tinggi, protein sasaran akan jatuh, mengakibatkan kehilangan protein sasaran; Kelajuan rendah, memakan masa dan kecekapan kerja yang rendah;

7. Langkah berjaga-jaga apabila kepala pistol meluas ke dalam tiub ultrafiltrasi

Apabila menambah penyelesaian protein atau penimbal ke tiub ultrafiltrasi, kepala pistol biru boleh digunakan; Walau bagaimanapun, apabila protein sasaran pekat diserap dari bahagian bawah tiub ultrafiltrasi, kepala pistol kuning mesti digunakan; Apabila kepala pistol dimasukkan ke dalam tiub ultrafiltrasi, ia mesti dihalang daripada menyentuh membran penapis untuk mengelakkan menumbuk membran penapis;

8. Kurangkan kehilangan penjerapan protein tiub ultrafiltrasi

Membran tiub ultrafiltrasi boleh menyerap protein, yang akan mengurangkan protein sasaran sebanyak kira-kira 30%; Untuk mengurangkan kehilangan protein, selepas menyerap larutan protein sasaran, bersihkan bahagian bawah tiub ultrafiltrasi dengan penampan protein untuk mencuci sebahagian besar protein yang diserap oleh membran penapis dan mengurangkan kehilangan protein sasaran; Sekiranya protein yang disucikan tertumpu, perhatikan bahawa jumlah pekat tidak boleh terlalu kecil; Secara amnya, tidak kira betapa emparan, kira-kira 200 μ larutan protein L akan dikekalkan di bahagian bawah;

9. Bagaimana untuk menentukan kegagalan tiub ultrafiltrasi

Di bawah penggunaan biasa, apabila membran penapis tidak tertusuk, penyelesaian protein pekat tidak mengandungi protein atau jumlahnya sangat rendah (termasuk protein sasaran), manakala penyelesaian yang ditapis pertama mengandungi protein sasaran, ia menunjukkan bahawa membran penapis tidak sah dan perlu diganti dengan tiub ultrafiltrasi baru.