Langkah berjaga-jaga untuk penggunaan tiub ultrafiltrasi
(1) Pilih tiub ultrafiltrasi yang sesuai. Secara amnya, berat molekul yang akan dikekalkan tidak boleh lebih besar daripada 1 / 3 daripada berat molekul protein sasaran. Sebagai contoh, jika berat molekul protein sasaran ialah 35kDa, tiub ultrafiltrasi dengan berat molekul 10kDa boleh dipilih. Sekiranya berat molekul protein sasaran adalah kira-kira 10kd, tiub ultrafiltrasi dengan berat molekul 3KD boleh digunakan. Berhati-hati membaca manual arahan dan memberi perhatian kepada toleransi yang berbeza membran ultrafiltrasi kepada pelbagai bahan kimia.
(2) Ultrafiltrasi yang baru dibeli kering. Tambah air ultrapure sebelum digunakan, dan air akan sepenuhnya melalui membran. Pra sejukkannya dalam mandi ais atau peti sejuk selama beberapa minit. Kemudian tuangkan air dan tambah larutan protein. Jumlah yang ditambah tidak boleh melebihi garis putih di bahagian atas tiub. Operasi mestilah ringan. Sebelum menambah penyelesaian protein, tiub ultrafiltrasi perlu dimasukkan ke dalam ais untuk precooling.
(3) Baki. Kedua-dua jisim dan pusat graviti harus seimbang. Perhatikan bahawa kelajuan dan pecutan tidak boleh terlalu cepat, jika tidak, membran ultrafiltrasi akan rosak secara langsung. Mulakan ultrafiltrasi empar (sentrifuge precooling hingga 4 darjah). Selepas RPM sentrifuges yang berbeza ditukar menjadi G, ia berbeza. Laraskan pecutan sentrifuge ke gear terendah untuk mengurangkan tekanan pada membran. Perhatikan bahawa anda mesti menunggu sehingga sentrifuge mencapai kelajuan sasaran sebelum meninggalkan sentrifuge, jika tidak apabila terdapat masalah dengan sentrifuge, anda tidak boleh menanganinya pada kali pertama. Arah membran dan aci berputar hendaklah diselaraskan mengikut arahan (dalam kes sudut berputar sentrifuge, membran adalah serenjang dengan aci). Dalam penggunaan praktikal, kelajuan biasanya lebih rendah daripada yang dalam manual, yang boleh memanjangkan hayat perkhidmatan paip empar.
(4) Apabila ia tertumpu kepada baki 1ml, ambil larutan penimbal 50ul dan tambah 10ul untuk mengalir untuk melihat sama ada ia menjadi biru, untuk menilai sama ada tiub ultrafiltrasi bocor protein. Sekiranya tiub bocor, tuangkan lapisan atas dan aliran melalui tiub baru dan mulakan ultrafiltrasi. Untuk menilai dengan tepat sama ada tiub bocor, sentrifuge dengan 5mgml BSA selama 10 minit, kemudian ambil aliran melalui, jalankan gam protein atau Bradford untuk pengukuran kasar, dan terus menambah penyelesaian protein yang tinggal untuk kepekatan (beroperasi di atas ais untuk mengelakkan protein daripada dipanaskan) sehingga semua penyelesaian pekat ditambah. Perhatikan sama ada pemendakan protein berlaku semasa sentrifugasi, mengakibatkan penyumbatan paip. Sekiranya hujan berlaku, tentukan punca hujan tertentu, sama ada kepekatan protein terlalu tinggi atau penampan tidak sesuai; Yang pertama boleh diselesaikan dengan ultrafiltrasi serentak dengan pelbagai tiub ultrafiltrasi untuk mengurangkan kepekatan. Yang terakhir adalah untuk menukar penyelesaian penimbal yang berbeza sehingga protein tidak mendakan.
(5) Langkah-langkah sebelumnya digunakan untuk menumpukan protein. Jika anda ingin menukar penimbal, apabila jumlah larutan protein tertumpu kepada kira-kira 1ml, perlahan-lahan menambah penimbal baru (ultrafiltrasi melalui membran ultrafiltrasi 0.22um), dan kemudian menumpukan kepada kira-kira 1ml untuk tiga kali berturut-turut. Jumlah akhir kepekatan terakhir bergantung kepada kepekatan protein yang diperlukan, yang secara amnya tidak lebih daripada 500ul, atau ia boleh tertumpu kepada kurang daripada 200ul. Mengikut kepekatan isipadu sekurang-kurangnya 10 kali setiap kali, ia boleh mencapai lebih daripada 1000 kali tiga kali, yang pada dasarnya boleh mencapai tujuan menukar penimbal.
