Cara Memilih Tiub Ultrafiltrasi Yang Sesuai
Tiub ultraturasan yang biasa digunakan untuk kepekatan protein dan penggantian penimbal sering digunakan dalam tiub ultraturasan. Terdapat model lain, yang mempunyai saiz volum yang berbeza dan tiub ultraturasan, bergantung pada berat molekul protein sasaran, isipadu sebelum kepekatan dan isipadu sasaran kepekatan. Boleh guna semula.
1. Pilih tiub ultraturasan yang sesuai, terutamanya mengambil kira MWCO dan isipadu kepekatan. Secara amnya, berat molekul tidak boleh lebih besar daripada 1/3 berat molekul protein sasaran. Jika berat molekul protein sasaran adalah kira-kira 10 kd, tiub ultraturasan dengan berat molekul tertahan 3 KD boleh digunakan.
2. Ultrafiltrasi yang baru dibeli kering. Masukkan air milliq sebelum digunakan. Air melepasi sepenuhnya melalui membran dan disejukkan terlebih dahulu dalam mandi ais atau peti sejuk selama beberapa minit. Kemudian tuangkan air untuk menambah larutan protein. Jumlah larutan protein tidak boleh melebihi garis putih di bahagian atas tabung uji. Operasi yang mudah. Sebelum menambah larutan protein, tiub ultrafiltrasi perlu dimasukkan ke dalam ais untuk pra penyejukan.
3. Imbangan. Jisim dan pusat graviti mesti seimbang. Ambil perhatian bahawa kelajuan dan pecutan tidak boleh terlalu cepat, jika tidak, membran ultraturasan akan rosak secara langsung. Mulakan ultraturasan emparan (sejukkan emparan hingga 4 darjah). Arah diafragma dan aci berputar boleh dilaraskan mengikut arahan (dalam kes centrifuge sudut, diafragma berserenjang dengan aci). Dalam penggunaan sebenar, kelajuan am adalah lebih rendah daripada yang dinyatakan dalam manual, yang mungkin memanjangkan hayat perkhidmatan paip empar.
4. apabila tertumpu kepada baki 1ml, [ambil larutan Bradford isi rumah 50ul, tambah cecair 10ul untuk melihat sama ada ia bertukar menjadi biru, dan tentukan sama ada tiub ultrafiltrasi bocor protein. Jika tiub bocor, tuangkannya ke dalam lapisan atas dan kemudian mengalir kembali ke tiub baru untuk memulakan ultraturasan. Untuk menentukan dengan tepat sama ada tabung uji bocor, sila 5mg 10min emparan 10min, kemudian luluskannya, jalankan gel protein atau Bradford] [ukuran kasar]. Teruskan menambah larutan protein yang tinggal kepada pekat (beroperasi pada ais untuk mengelakkan pemanasan protein) sehingga semua larutan pekat ditambah. Semasa sentrifugasi, perhatikan sama ada pemendakan protein berlaku dan menyebabkan penyumbatan tiub. Jika pemendakan berlaku, sila tentukan punca khusus pemendakan, sama ada kepekatan protein terlalu tinggi atau sama ada penimbal tidak sesuai; Yang pertama boleh diselesaikan dengan menggunakan pelbagai tiub ultrafiltrasi pada masa yang sama untuk mengurangkan kepekatan, manakala yang kedua boleh menukar penimbal yang berbeza sehingga protein mengendap.
5. Langkah sebelumnya digunakan untuk memekatkan protein. Jika penimbal hendak diganti, apabila jumlah larutan protein tertumpu kepada kira-kira 1ml, tambahkan penimbal baharu secara perlahan-lahan (penapisan ultra melalui 0.22um membran ultraturasan), dan kemudian pekat secara berterusan kepada kira-kira 1ml selama tiga kali, jadi bahawa kepekatan akhir bergantung kepada kepekatan protein yang diperlukan, yang biasanya tidak lebih daripada 500ul atau kurang daripada 200ul. Mengikut kepekatan volum sekurang-kurangnya 10 kali setiap kali, ia adalah lebih daripada 1000 kali ganda daripada tiga kali, yang pada asasnya boleh mencapai tujuan menukar penimbal.
6. Keluarkan pekat protein akhir. Beroperasi di atas ais. Menggunakan hujung pipet kuning (200ul), masukkan hujung pipet perlahan-lahan di sepanjang tepi, kemudian tiup perlahan-lahan dan campurkan larutan protein. Berhati-hati agar tidak menyentuh membran ultraturasan. Sedut larutan pekat hingga 200ul setiap kali sehingga disedut sepenuhnya. Ia tidak perlu mengekstrak larutan pekat terakhir di bahagian bawah tabung uji, jika tidak, ia terlalu sukar dan membran ultraturasan mungkin rosak. Akhir sekali, air milliq ditambah ke dalam tiub ultrafiltrasi tanpa melalui membran ultrafiltrasi untuk mengelakkan kehilangan air dan pengeringan membran.
7. Berikut adalah langkah-langkah untuk merawat tiub ultraturasan dan menggunakan semula tiub ultraturasan.
8. Tuangkan air ke dalam tiub ultrafiltrasi dan bilas perlahan-lahan dengan air milliq selama beberapa kali. [jika terdapat pemendakan protein yang jelas di bahagian bawah tabung uji, anda boleh menambah air terlebih dahulu dan kemudian meniupnya dengan pipet. Berhati-hati untuk tidak menyentuh membran. Sedimen itu tergantung ke bawah dan kemudian lari. Anda tidak boleh siram dengan air paip. Selepas menambah 0.2m larutan NaOH, letakkannya pada suhu bilik selama 20 minit dan imbangkan tiub ultraturasan dalam tempoh ini. Sentrifuge selama 10 minit lagi. Tuangkan baki larutan NaOH dan rendam teras kapas dalam bikar (1 atau 2L) air Milliq, diletakkan selama beberapa jam, dan kemudian diganti dengan air baru, diletakkan selama beberapa jam untuk mencairkan kepekatan NaOH secara berterusan. Basuh tabung uji 50ml dan tutup dengan air paip, dan basuh dinding dalam dengan air milliq.
9. Keluarkan inti tabung uji yang telah direndam, masukkan ke dalam air milliq penuh, dan kemudian isi tabung uji 50ml dengan air milliq. Masukkan inti tiub perlahan-lahan ke dalam 50ml.
Tiub emparan, toskan dan bahagikan air, kemudian tutup dan simpan pada suhu 4 darjah sehingga penggunaan seterusnya. Secara umumnya, mengikut langkah dan langkah berjaga-jaga di atas, setiap tiub tidak akan pecah dalam masa tiga atau empat tahun.
