Kajian Mengenai Keupayaan Menghilangkan Virus Proses Hilir Antibodi Monoklonal
Produk bioteknologi yang diperoleh daripada talian sel mungkin berisiko dicemari virus - tahap bergantung kepada beberapa faktor, termasuk sumber penyediaan, bahan mentah yang digunakan, sistem pengeluaran, reagen penulenan dan bahan bantu. Mengkaji penyingkiran atau penyahaktifan virus dalam proses pembuatan adalah langkah utama dalam mengurangkan potensi penghantaran iatrogenik virus patogen dan dengan itu mengurangkan risiko, yang penting untuk keselamatan produk. Sebelum produk biologi boleh memasuki ujian klinikal dan dipasarkan, proses pengeluarannya mesti ditunjukkan untuk mempunyai keupayaan untuk membuang virus yang diketahui dan dianggap.
01 Penilaian keselamatan virus produk antibodi monoklonal
Penyelidikan tentang keupayaan penyingkiran virus biasanya dengan menambahkan virus penunjuk titer yang diketahui kepada produk perantaraan pada peringkat pengeluaran yang berbeza, kemudian menentukan titer virus sisa dalam sampel yang dirawat oleh proses tertentu, dan akhirnya menilai nilai pengurangan log (LRV) titer virus. Langkah-langkah proses untuk LRV Lebih besar daripada atau sama dengan 4log10 secara amnya dianggap sebagai langkah penyingkiran virus yang berkesan. Proses dengan LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.
Apabila menggunakan kaedah proses pengeluaran simulasi (proses dikurangkan), adalah perlu untuk mereka bentuk penyelidikan penyingkiran/penyahaktifan virus yang munasabah dan pelan ujian yang berkaitan dengan proses pengeluaran sebenar sejauh mungkin, terutamanya langkah-langkah proses pengeluaran yang berkesan. Proses simulasi hendaklah konsisten dengan proses sebenar dari segi parameter ujian dan keadaan kawalan.
02 Biasanya menunjukkan virus dan skim pengesahan
Virus penunjuk biasa ditunjukkan dalam Jadual 1.
Pada peringkat Aplikasi ubat baru (IND) penyiasatan, produk bioteknologi memerlukan kajian pelepasan virus untuk sekurang-kurangnya 2 model virus, biasanya memilih satu retrovirus (X-MuLV) dan satu parvovirus (MMV). Semasa fasa permohonan lesen biologi (BLA), kajian penyingkiran virus biasanya dijalankan menggunakan 3-5 virus khusus/bukan khusus dan 3-5 langkah proses dinilai untuk menunjukkan bahawa produk mempunyai faktor keselamatan yang mencukupi daripada perspektif keselamatan virus. Disebabkan oleh garis panduan yang berbeza di dalam dan luar negara, terdapat beberapa perbezaan dalam langkah pengesahan penghapusan virus yang digunakan untuk pengisytiharan. Skim pengesahan pembersihan virus yang biasa digunakan dalam proses pengeluaran mAb ditunjukkan dalam Jadual 2.
03 Keupayaan penyingkiran virus proses hiliran
3.1 Keupayaan proses hiliran untuk membuang virus yang berbeza
Sehingga 2009, produk antibodi monoklonal diserahkan kepada FDA untuk IND dan BLA, kromatografi pertalian Protein A, pH rendah, kromatografi pertukaran anion AEX (mod penembusan aliran), kromatografi pertukaran kation CEX (mod pengikat - elusi), dan pengesahan pembersihan virus tidak termasuk penapisan virus ialah keluarga virus penunjuk yang paling biasa digunakan dan min dan julat kesan pelepasannya ditunjukkan dalam Rajah 1.
Untuk retrovirus, kecuali CEX, yang mempunyai LRV kira-kira 3log10 (seperti yang ditunjukkan dalam carta bar A dalam Rajah 1), proses lain adalah teguh (LRV Lebih besar daripada atau sama dengan 4log10). Herpesvirus dan retrovirus mempunyai kesan pelepasan yang sama dan LRV > 4log10 (seperti yang ditunjukkan dalam carta B-bar dalam Rajah 1). Virus kecil yang tidak bersampul, seperti parvovirus, lebih sukar untuk dibuang dengan berkesan, tahan terhadap rawatan kimia, dan tidak mudah terperangkap oleh penapis (ditunjukkan dalam carta C-bar dalam Rajah 1). Hanya penapis AEX dan virus kecil yang berkesan dalam mengeluarkan parvoviridae (purata LRV > 4log10).
Proses yang ditunjukkan dalam Rajah 1 ialah ProteinA, AEX(mod penembusan aliran), CEX(mod concomitation-elusi), Penyahaktifan pH rendah ("tidak lengkap "berbanding" lengkap "penyingkiran), dan penapisan devirus apertur besar dan kecil.
3.2 Faktor-faktor yang mempengaruhi proses hiliran terhadap keupayaan penyingkiran virus
Taburan nilai LRV untuk setiap proses ditunjukkan dalam Rajah 2. Kajian dengan 0 ~ 21og10 diklasifikasikan sebagai kumpulan LRV rendah, dan mereka yang mempunyai lebih daripada 6log10 diklasifikasikan sebagai kumpulan LRV tinggi untuk analisis perbandingan.
3.2.1 Kromatografi pertalian ProteinA
Tidak terdapat korelasi yang signifikan antara nilai LRV proses Protein A dan penimbal baki/basuh, pengisi, komposisi eluen dan nilai pH elusi. Penyebut biasa kumpulan LRV rendah ialah bahan mentah agak kompleks, dan mungkin interaksi kompleks bahan mentah dan pengisi memberi kesan negatif kepada keupayaan lajur kromatografi untuk mengeluarkan virus.
3.2.2 AEX (Mod Aliran Melalui)
Strauss et al. menunjukkan bahawa pH dan kekonduksian sampel AEX boleh menjejaskan LRV. Walau bagaimanapun, keputusan statistik Miesegaes et al menunjukkan bahawa, sama dengan ProteinA, LRV AEX (mod penembusan aliran) tidak mempunyai korelasi yang signifikan dengan penimbal, pengisi, pH dan kekonduksian yang berbeza, yang mungkin disebabkan oleh pengoptimuman pH dan kekonduksian. dalam keadaan proses kes yang dilaporkan.
3.2.3 CEX(Pengikat - Mod Elusi)
Pembuangan virus melalui proses CEX tidak cukup mantap. Tiada korelasi yang ketara antara LRV dalam kumpulan LRV tinggi dan penimbal, tahap pengalaman, atau sebarang sifat lajur kromatografi, seperti ketinggian lajur dan jenis resin. Walau bagaimanapun, nilai pH keseimbangan/pemuatan dan elusi yang digunakan dalam kajian LRV tinggi kedua-duanya lebih rendah, pada 5.3±0.2; Dalam kumpulan LRV rendah, pH ialah 6.0±0.2. Faktor lain ialah kepekatan garam dalam penimbal juga boleh menyebabkan perbezaan nilai LRV. Penampan yang digunakan dalam kajian LRV rendah mempunyai kepekatan garam yang lebih tinggi, dengan purata kepekatan 290±120 mM dalam larutan pemuatan/pengimbangan dan 340±70 mM dalam eluen, manakala kepekatan NaCl dalam kajian LRV tinggi ialah 58 ±27 mM dan 183±31 mM masing-masing.
3.2.4 Penyahaktifan pH rendah
Dalam proses pH Rendah, pH ialah parameter proses utama, dan pH 3.8 mencukupi untuk menyahaktifkan retrovirus mengikut darjah . Kumpulan LRV rendah mempunyai pH 3.9, manakala kajian LRV tinggi mempunyai pH 3.4.
3.2.5 Mengeluarkan Penapisan Virus
Bagi kedua-dua penapis apertur kecil dan besar, nilai LRV bagi penyingkiran MuLV adalah tidak kurang daripada 2log10, dan hanya 1% daripada kajian berada di bawah 3log10 (ditunjukkan dalam lajur h dan i dalam Rajah 2). Kelegaan keseluruhan retrovirus oleh penapis virus apertur besar adalah lebih rendah daripada penapis virus apertur kecil (seperti ditunjukkan dalam carta C-bar dalam Rajah 1). Sebab utama yang mempengaruhi hasil penyingkiran parvovirus ialah jenis penapis yang berbeza. Secara umum, penapisan anti-virus boleh mengalih keluar virus dengan pasti.
Prosesnya ialah Protein A(a), mod penembusan AEX (b), pengikatan CEX - mod elusi (c), pengikatan AEX Ⅰ mod elusi (d), Penyahaktifan pH rendah (" tidak lengkap "dan" kelegaan lengkap)(e ~ g), dan saiz liang besar (h) dan saiz liang kecil (i ~ j) penapisan devirus (di mana, a ~ i: Retrovirus; j: Parvovirus).
04 Inovasi dan cabaran dalam penilaian keselamatan virus
Pembangunan dan inovasi berterusan dalam bidang proses biofarmaseutikal hiliran pasti akan membawa inovasi dalam penilaian pembersihan virus. Kemajuan dalam proses huluan dan hiliran-seperti bioproses aliran berterusan-telah menjadikannya perlu untuk menilai dan mewujudkan proses penyingkiran virus yang berkesan dan teguh. Semasa aliran berterusan, langkah seperti penyahaktifan virus dan penapisan virus masih dijangka dilakukan dalam mod kelompok. Walaupun keupayaan penyingkiran virus proses kromatografi dalam mod aliran berterusan tidak sepatutnya berbeza dengan ketara daripada pemprosesan kelompok, ia mesti disokong oleh data.
05 Tinjauan
Dari perspektif keselamatan virologi, keselamatan cemerlang industri biofarmaseutikal sebahagian besarnya boleh dikaitkan dengan pematuhan ketat industri terhadap tiga strategi utama untuk keselamatan virus: mendapatkan dan menguji sumber bahan dan bank sel yang mencukupi, mendokumenkan penilaian pelepasan virus (kajian pengesahan virus), dan ujian virus dalam proses. Ciri-ciri ubat biologi yang dihasilkan oleh substrat sel baru mungkin berubah dengan risiko yang berbeza, dan strategi pengurusan risiko yang baik diperlukan untuk memastikan keselamatan ubat biologi. Teknologi Guidling mempunyai pasukan teknikal profesional yang berpengalaman, meliputi proses penapisan daripada percubaan kecil, percubaan perintis, kepada pengeluaran berskala besar, penapis membran dan membran kami digunakan secara meluas dalam pra-penapisan, penapisan mikro, ultraturasan, kepekatan penapisan nano, pengekstrakan dan pengasingan; Barisan produk kami yang banyak, daripada penapisan makmal sekali guna kecil kepada sistem penapisan berorientasikan pengeluaran, ujian kemandulan, penapaian, kultur sel dan banyak lagi, memastikan peningkatan produktiviti.
Jiuling untuk memastikan kualiti produk sebagai penunjuk pertama, dalam mengejar "mengurangkan kos, meningkatkan kecekapan" di jalan untuk meneroka, berharap untuk bekerjasama dengan anda pada masa hadapan untuk menghadapi cabaran industri dan mencari pembangunan yang lebih baik.
