Kromatografi Membran Pertukaran Anion Lemah DEAE

Kromatografi Membran Pertukaran Anion Lemah DEAE – Pengenalan Produk

 

1. Gambaran keseluruhan

Kromatografi pertukaran anion lemah DEAE ialah teknik penulenan berdasarkan perbezaan sifat cas dan ketumpatan cas pelbagai biomolekul. Oleh kerana kebanyakan biomakromolekul mengandungi kumpulan berfungsi seperti kumpulan karboksil atau hidroksil, ciri cas dan magnitudnya boleh diselaraskan dengan mengubahsuai pH larutan penimbal. Selepas biomolekul terikat pada medium pertukaran anion atau kation bercas bertentangan, pemisahan dicapai dengan menukar kekuatan ionik atau pH fasa mudah alih. Molekul dengan pertalian pengikatan yang lebih lemah dielusi dahulu, diikuti oleh molekul yang mempunyai pertalian pengikatan yang lebih kuat, dengan itu mencapai pemisahan yang berkesan

 

2. Kelebihan Produk

2.1 Kecekapan tinggi: Mencapai pengikatan kuat pada kadar aliran sehingga 40 kali lebih tinggi daripada kromatografi-berasaskan resin. Berbanding dengan kromatografi katil-pembungkus tradisional, kromatografi membran memendekkan keseluruhan masa proses kira-kira 30–40 kali.

2.2 Kecekapan pengikatan yang tinggi: Kromatografi membran mempamerkan kapasiti pengikatan yang tinggi dan kadar alir yang tinggi di bawah penurunan tekanan rendah, membolehkan biomolekul bercas ditangkap dalam satu laluan melalui lajur.

2.3 Boleh berskala dan fleksibel: Siri penuh produk kromatografi membran boleh memenuhi keperluan penulenan biomakromolekul yang pelbagai, meliputi semua peringkat daripada pembangunan proses hingga pengeluaran berskala-besar. Reka bentuk struktur jenis kapsul-menyokong kedua-dua-operasi sekali guna dan penggunaan semula selepas pembersihan.

2.4 Peningkatan produktiviti: Reka bentuk padat meminimumkan jejak kemudahan. Dengan menghapuskan prosedur pembungkusan lajur, pembersihan, pengesahan pembersihan dan penyimpanan lajur, sistem boleh dikendalikan terus selepas penyamaan penimbal tanpa pembungkusan atau penyimpanan lajur. Kos buruh boleh dikurangkan sehingga 50%.

 

3. Parameter Teknikal

3.1 Bahan Struktur

	skala makmal	skala kecil	skala perintis	skala pengeluaran
Isipadu membran	0.2ml	5ml	140ml	5L
Struktur sokongan membran	Polipropilena (PP)
Perumahan membran	Polipropilena (PP)
Wahai cincin	silikon

3.2 Ciri-ciri operasi

	skala makmal	skala kecil	skala perintis	Skala pengeluaran
Isipadu membran	0.2ml	5ml	400ml	5L
Kadar aliran yang disyorkan	1-6ml/min	25-150ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Suhu operasi maksimum	35 darjah
Tekanan operasi maksimum	3bar (25 darjah )
Tekanan pembezaan maksimum	3bar (25 darjah )
Keadaan penyimpanan	20% 乙醇水溶液 20% larutan akueus etanol

Rajah 1. Perubahan dalam kapasiti pemuatan kromatografi membran selepas pelbagai kegunaan dipantau dengan BSA.

Selain itu, kami menilai kecekapan penyingkiran protein sel hos dan asid nukleik menggunakan kromatografi membran DEAE. Hasilnya adalah seperti berikut.

	DNA				HCP
	Pemulihan IgG	Kandungan(pg/mg IgG)oleh RT PCR		Faktor Penyingkiran	Kandungan(ng/mg IgG)oleh Elisa		Faktor Penyingkiran
Lari	%	Sebelum Membran DEAE	Selepas Membran DEAE	Log	Sebelum Membran DEAE	Selepas Membran DEAE	Log
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Jadual 1. Kadar penyingkiran DNA dan protein sel perumah daripada CHO-dinyatakan IgG menggunakan kromatografi membran DEAE.

Satu siri eksperimen menunjukkan bahawa kromatografi membran Q boleh membuang kekotoran dengan berkesan, sambil mengekalkan kadar pemulihan yang tinggi bagi sasaran IgG.

Di samping itu, kami membandingkan kromatografi membran Gudiling dengan jenama yang diimport, dan data kapasiti pemuatan adalah seperti berikut.

Rajah 2. Memuatkan prestasi protein yang berbeza pada kromatografi membran dan produk pesaing kami

Penilaian keseluruhan menunjukkan bahawa kapasiti pemuatan kami adalah setanding dengan produk import.

Rajah 3. Prestasi modul kromatografi membran DEAE dalam ujian protein kolagen

Menggunakan modul kromatografi membran DEAE, keputusan pengesahan menunjukkan bahawa kebanyakan protein kolagen sasaran boleh ditangkap dan dicairkan menggunakan 135 mM NaCl.

Melalui ujian di bawah keadaan elusi yang berbeza, kami mendapati bahawa kromatografi membran dan kromatografi gel agarose mempamerkan tingkah laku elusi yang sama, di mana ketulenan protein berbeza dengan ketara di bawah kepekatan garam yang berbeza. Dalam R&D dan pengeluaran praktikal, adalah perlu untuk menentukan secara kuantitatif keadaan elusi keseimbangan optimum untuk mendapatkan-protein sasaran ketulenan tinggi.

 

4. Kes aplikasi klasik

Penyingkiran DNA, virus, protein sel perumah, dan endotoksin

Penahanan plasmid, virus, asid nukleik, dan protein, serta penulenan oligonukleotida

 

5. Aliran kerja pengendalian

5.1: Penyediaan dan pemasangan peralatan

5.1.1 Modul kromatografi membran hendaklah dipasang pada sistem kromatografi AKTA dengan cara yang serupa dengan lajur resin yang dibungkus, memastikan arah aliran sejajar dengan anak panah dan arah masuk. Sambung menggunakan penyambung Luer atau kelengkapan pengapit.

5.1.2 Tetapkan kadar aliran masuk kepada 5–10 MV/min dan gunakan penimbal keseimbangan untuk membersihkan udara. Teruskan siram sehingga tiada buih diperhatikan pada alur keluar, kemudian sambungkan alur keluar meresap ke sistem kromatografi

5.2:Rawatan pra{0}}guna

5.2.1: Tetapkan kadar aliran masuk kepada 5–10 MV/min dan lakukan pra{3}}rawatan dengan 0.5 M NaOH untuk lebih daripada 5 MV untuk memastikan membran mencapai keseimbangan.

5.2.2: Di bawah kadar aliran yang sama, pra{1}}rawatan selanjutnya dengan penimbal keseimbangan (1× PBS) untuk lebih daripada 5 MV untuk memastikan membran mencapai keseimbangan.

5.3 Proses kromatografi

5.3.1

Tetapkan kadar aliran masuk kepada 5–10 MV/min dan pra-rawat dengan penimbal keseimbangan lebih daripada 5 MV sehingga membran mencapai keseimbangan.

5.3.2

Selepas sampel pra-ditapis melalui penapis 0.22 μm, muatkan sampel sehingga pemuatan selesai atau kapasiti pemuatan kromatografi dicapai.

5.3.3

Basuh dengan penimbal keseimbangan lebih daripada 10 MV sehingga penyerapan UV berkurangan ke paras garis dasar.

5.3.4

Gunakan elusi kecerunan atau elusi linear mengikut reka bentuk proses dan kumpulkan sampel dalam pecahan mengikut keperluan.

5.4,CIP Post-rawatan penggunaan – CIP peranti kromatografi membran

5.4.1

Tetapkan kadar aliran masuk kepada 5–10 MV/min dan lakukan pembersihan-di-rawatan (CIP) dengan 0.5 M NaOH untuk lebih daripada 10 MV sehingga penyerapan UV menurun di bawah garis dasar.

5.4.2

Selepas membasuh beredar selama 30 minit, tukar kepada pencucian air sehingga pH antara 7–8, kemudian teruskan pembersihan dengan etanol 20% sehingga kekonduksian kekal hampir malar.

5.5, Penyimpanan kromatografi membran:

Selepas penggunaan dan penyiapan CIP, modul membran boleh dikeluarkan dan disimpan dengan merendam dalam etanol 20%, atau disimpan dalam talian pada suhu bilik dalam larutan etanol 20%. Larutan etanol 20% perlu diperiksa dan diganti secara berkala.

 

6. Memesan maklumat

DEAE-jenis penapis kapsul kromatografi membran pertukaran anion lemah

	Skala makmal-.	skala kecil	Skala juruterbang	Skala pengeluaran
Model produk	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Isipadu membran	0.2ml	5ml	400ml	5L

Cool tags: kromatografi membran pertukaran anion lemah deae, China, pembekal, pengilang, kilang, borong, pukal, dalam stok, sampel percuma